生物实验室常识

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生物实验室常识

1.在重蒸酚中什么缘故加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇？储存在冰箱中的酚，容易被空气氧化而变成粉红色，如此的酚容易降解DNA，一样不能够使用。为了防止酚的氧化，可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫，不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DNase的活性。2.如何将不同构型的质粒DNA区别开？由于不同构型的DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率不同，ccc DNA的泳动速度最快，通过凝胶电泳方法可将不同构型的DNA区别开。3.用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，什么缘故？异戊醇能够降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相坚持稳固。4.用乙醇沉淀DNA时，什么缘故加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于集合沉淀。

5.在提取RNA时经常使用异硫氰酸胍，有什么作用？RNA是一种极易降解的核酸分子。高浓度强变性剂异硫氰酸胍使细胞结构迅速被破坏，使RNA从细胞中开释出来。同时高浓度异硫氰酸胍还使细胞内的RNA酶失活，使开释出的RNA不被降解。6.蛋白印迹中封闭液的作用？封闭液的作用是封闭未吸附蛋白的部位，以减少非特异性结合背景的阻碍。常用的封闭液有脱脂奶粉、小牛血清等。7.DNA通常储存在什么缓冲液中？采纳TE缓冲液，Tris-HCl的缓冲系统，加入EDTA能够螯合二价金属离子进而抑制依靠于二价金属离子的DNA酶的活性，对DNA起到爱护作用。8.在酶切反应缓冲液中什么缘故加入BSA？通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起爱护作用。9.简单的克隆载体必需包括什么？复制起点；选择标记：要紧是抗性基因；多克隆位点：便于外源DNA的插入。

10.用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性。11.在分离DNA时，要使用EDTA，什么缘故？


EDTA是金属离子螯合剂，螯合二价离子，抑制核酸酶的活性。12.在分离DNA过程中，造成DNA分子断裂的因素有哪些？核酸酶降解；化学降解；物理剪切。13.使用离心机应注意什么？第一应该依照自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管，使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的最大承诺转速。离心前注意严格 平稳样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看管，发觉离心机专门应赶忙关闭离心机。离心终止后要安放好转子。

14.分子生物学实验室常用的灭菌方法有哪些？高压蒸汽灭菌、干热灭菌、化学药剂消毒、过滤除菌15.使用移液器有哪些注意事项？垂直吸液、慢吸慢放；选择合适的量程范畴，不能超过量程使用；选择与移液器匹配的枪头，安装枪头时不要用力太猛；移液器每日用完后，应旋到最大刻度。

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