论文开题报告

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开题报告



微生物发酵吴茱萸碱

中药吴茱萸为芸香科植物Evodiarutaecarpa(Juss．)Benth．干燥近成熟的果实，有温中去寒、簌肝止痛之功效，常用于治疗脘腹冷痛、呕吐泄泻、头痛、胃痛和痛经等，是中药成药“吴茱萸汤”和“左金丸”主要成分．《本草纲目》称吴茱萸“开郁化滞，治吞酸、厥阴、痰涎头痛、阴毒腹痛、疝气血痢和喉舌生疮”，近代医学亦证明吴茱萸有镇痛、安神、抗菌和抗缺氧等药理作用[3]．为了明确吴茱萸活性成分，我们对吴茱萸的化学成分做了较为系统的研究．吴茱萸的无水乙醇浸提物采用硅胶柱层析分离鉴定了六个化合物结构，其中包括三个吲哚喹唑啉类生物碱，分别为吴茱萸碱(evodiamine 1)、吴茱萸次碱(rutaecarpine 2)、l4一甲酰基二氢吴茱萸次碱(14一formyldihydromtaecarpine 3)；两个喹诺酮类生物碱，分别为1一甲基-2一[(6z，9Z)6，9一十五二烯]4(1H)一喹诺酮(1-methy-2一[(6Z，9Z)-6，9一pentadecadieny1]-4(1H)一quinolone 4)、二氢吴茱萸新碱(dihydroevo—carpine 5)；及一个植物甾醇化合物p一谷甾醇(p—sitosterol 6)．



一 原料预处理


1.吴茱萸的炮制

1．1净选与加工 1．2炮制 1．3机械粉碎 2.生物碱的提取

方法一：超临界萃取，二氧化碳作为超临界流体，通过提高萃取压力或加入少量极性溶剂，可减弱有效成分和吴茱萸中其他成分化学键的强度，从而使有效成分溶解于超临界二氧化碳

方法二：采用超临界液体法提取生物碱， 以无水乙醇作为夹带剂，萃取压力45 MPa、萃取温度60℃ 、药材粒度60目、萃取时间1.4h。

方法三：微波辐射，高温使细胞破裂，再在较低温度下捕获有效成分

方法四：超声提取，高压造成细胞破裂，在用有机溶剂提取

3.生物碱的精制

粗提液中的有效成分纯度还不是很高 方法一：离子交换树脂或大孔吸附树脂


方法二：有机溶剂的萃取 方法三：膜分离 4.生物碱的含量测定

色谱柱：YWG—C18(10 m，250mm×4．6mm)

流动相：水一甲酵一乙腈(42：20：38) 流速为1．0ml/min； 柱温30℃ ； 检测波长260nm。

吴茱萸碱的保留时间为10．522min； 吴茱萸次碱的保留时间为14．749min 二 吴茱萸碱的转化

1. 将以上精制得到的有效成分进行发酵 发酵运用菌种：醋酸菌 2. 发酵液预处理 超滤法预处理发酵液。 三 转化产物的鉴定

1. HPLC法定量分析生物碱转化产物的衍生程度 2．HPLC制备色谱分离各转化组分

3．结构鉴定：红外光谱鉴定吴茱萸碱和吴茱萸次碱转化产物的结构

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