生化实验总结

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生化实验总结

随着实验的顺利完成，意味着生化大实验实习也将结束。虽然只有短短五天的时间，我觉得我们学到了很多很多知识，也认识到自己的问题存在。每个人都应该好好的深思。生化实验我们做的是酵母蔗糖酶的提取、分离和纯化。蔗糖酶又称转化酶。1928 年Dumas等首先指出酵母菌发酵蔗糖时必须有这种酶的存在。蔗糖在蔗糖酶的作用下，水解为葡萄糖和果糖，还原力增加，又由于生成果糖，甜度增加。按水解蔗糖的方式，蔗糖酶可分为从果糖末端切开蔗糖的β—D—呋喃果糖苷酶和从葡萄糖末端切开蔗糖的α—D—葡萄糖苷酶。前者存在于酵母中，后者存在于霉菌中。工业上多从酵母中提取。蔗糖酶在工业上用以转化蔗糖，增加甜味，制造人造蜂蜜，防止高浓度糖浆中的蔗糖析出，还用来制造含果糖和巧克力的软心糖等。

在老师和学长、学姐的的关心领导下，通过我们每个成员的齐心协力、共同努力顺利完成！取得了让人满意的结果。现就本次实验实习作以简单的总结。实验的流程大致是：蔗糖酶的提取—分离—纯化以及最后的定性、定量测定。我们每天都有着不同的任务。

实验第一天崔老师给我们讲了一些实验的基本操作要求和注意事项。然后进行仪器和用具的清。药品配制。清洗听起来大家都觉得很简单，其实不然。一个实验结果的好坏很大程度与你的仪器有很大的关系，一定要按要求认真的完成。接下来是我们配制药品和粗酶提取：药品配制一定要清楚你所要配制的药品种类和浓度，并准确称量、量取。因为药品的好坏是整个实验成功的关键因素。我们组在配制0.2%的葡萄糖溶液时就出现问题：陈晓花看错数据配成2%的溶度。在后来做标准曲线的时候我们才发现。二组配制的考马斯亮蓝也出现问题，原因有可能是大家去药品是被污染也有可能是配制过程就出错了。不管怎样我们都要重新做，这就浪费了时间。所以每一步每个人都要认真对待，即便是添加蒸馏水也要做到有始有终。粗酶提取我们采用甲苯法进行，有姜丽丽和李海民完成。由于甲苯有毒在使用过程中要戴口罩，在提取过程要采用蔗糖酶的最适温度35℃。使其充分的混匀水浴30min，隔夜，第二天进去离心。离心过程为保证酶活性必须采用低温离心机，完事后得到粗酶液25ml4℃保存，样品进行乙醇分级处理。离心过程要明确我们所要的是沉淀还是上清液。


第二天我们进行乙醇分级处理，这个还是很简单的。陈晓花和洪宇他们俩个合作完成的。在进行乙醇分级处理时事先计算好每次所需要的乙醇体积。由于乙醇溶解时会产生热，为保证酶活性再添加过程要缓慢加入并不定的搅拌。写到这我就想说实验过程合作真的很重要，并不是其他人都没事情做的。我们同事进行葡糖糖标准曲线和蛋白质标准曲线的绘制。这是一个要有耐心和细心的人去做。我选择了高琳和李荣华去做。绘制曲线过程我们每个都做了四次，结果都不是很理想。后来才知道是使用的考马斯亮蓝有问题。下午进行装柱子，胶液由老师统一给制备的。装柱子过程用滴管慢慢的加入并且不能间断以防止出现断层。众人皆看荣仔一个人操作。最后的时刻又出现问题了，胶面呈现凹凸不平，正好老师过来给我们指正错误。如果不进行处理对后面的分离会造成很大的影响。

实验做到第二天其实都不怎么累，我们还都挺欢乐的。第三天的到来让我们彻底改变了，我可以叫它黑色星期三。这一天我们在实验室连续11个小时。早上由老师统一指导进行上样。上样结束后进行分离，这是一个很漫长的时间我们大概做了9个小时。在等待出现结果的时刻每个人都很着急，出现结果那一刻我们都很兴奋。感觉自己的努力没有白费……每隔2min记录核酸蛋白仪上的数据同时检测是否有蔗糖酶流出。洗脱柱子采用0.15molNacl pbs溶液。并要测定每收集的蛋白液的蔗糖酶。我觉得这是很繁琐的工程，每收集一管都要进行测量。还好我们组员高琳姜丽丽同学很有耐心的完成，在这里真心感谢他们。其实今天的实验并不是很忙，只不过需要大家一直在等时间。我们组员都坚持到最后，即便那些没有进行操作的人也等在最后走，很高兴大家团结一致。最后庆祝我们的成果和犒劳自己的辛苦我们组的在一起吃饭。真的感谢他们的支持。

第四天的任务相比较很简单了，就是电泳纯化蛋白。李萍、荣李文彬、李华、李佳男、姜丽丽他们五个人完成。我和高琳进行定量测定。每人都很认真的负责自己的任务。实验终于在我们的辛苦下顺利的完成。看到自己的结果我们都露出微笑，功夫不负有心人。

作为组长我想说说自己在这次实习的感受：首先感谢老师和同学对我的信任和肯定，没有他们的支持我现在也不会心情愉快。刚开始我挺担心自己能不能做好，后来我发现其实很好带领的。作为组长我要根据对每个组员的了解进行任务划分，让他们做自己最拿手的实验。我觉得在这次试验中我分配的还是相当好的。

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