毕业设计 硕士学历论文方案设计

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1. 研究方法

(1) 利用生物信息学进行序列比对，同源性分析，预测亚细胞定位。

(2) 利用分子生物学技术克隆基因，构建载体，异源表达，确定亚细胞定位。 (3) 利用农杆菌介导法进行水稻基因转化。 2. 技术路线





3. 实验方法和步骤

(1) 查阅文献，利用NCBI，Target P，Signal P比对OsAPX同源基因，并预测亚细胞

定位。

(2) 克隆上一步中预测定位于叶绿体的OsAPX，构建瞬时表达载体，通过瞬时表达

技术确定定位于叶绿体的OsAPX。

(3) 选择一个已经明确定位于叶绿体的OsAPX，将其连接到pCold I载体上，经过

IPTG诱导，纯化后检测酶活性，制备抗体。 (4) 若该基因经过诱导具有活性，则将其连接到pOX载体上，以农杆菌介导法转入水稻中，对获得的转基因植株进行筛选以及生理生化分析，验证其在水稻中的功能。同时分别构建不同启动子启动的OsGLO3，OsOXO3，OsAPX的供体载体（启动子与基因的组合见表1）。




编号 1 2 3 4

组合 35SG3-UO3-UA E35G3-UO3-UA UG3-UO3-UA UG3-E35O3-UA

表1 需要构建的OsGLO3，OsOXO3，OsAPX与不同启动子的多基因组合 注：35S为35S启动子，E35为增强型35S启动子，U为UBI启动子，G3为OsGLO3，O3为OsOXO3，A为OsAPX

(5) 利用刘耀光老师提供的loxP/Cre多基因载体组装系统，进行多轮重组，构建不

同启动子组合表达OsGLO3，OsOXO3，OsAPX的多基因载体。

(6) 通过农杆菌介导法将这些多基因载体转入水稻中，对获得的转基因植株进行筛

选纯合以及生理生化分析，验证这三个基因构成的光合CO2浓缩机制能否实现叶绿体内CO2的浓缩，降低光呼吸的损耗，增加光合效率。 4. 可行性分析

（1）指导老师具有多年相关科研经验，能够提供很好的指导；

（2）本实验室长期进行光呼吸方面的研究,拥有系统的理论知识和各种相关配套的仪器，为本研究提供了理论和硬件支持；

（3）我已经完成相关专业课程的学习，掌握了相应的实验技术。已经阅读了一些相关的文献，对研究课题比较了解；

（4）已经在前人的基础上进行的工作初步证明了本实验的可行性。

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