育儿理论概述

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红花檵木叶黄酮类化学成份的分离和鉴定

1 仪器与试药 Avance-600 FT型核磁共振光谱（NMR）仪（瑞士Bruker 公司）；HP5973 型质谱（MS）仪（美国安捷伦科技有限公司）；RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。ODS（美国GE 公司）；Sephadex LH-20 凝胶（美国Pharmacia公司）；各种柱色谱硅胶（200～300 目）及GF-254薄层硅胶板（0.25 mm）均购自青岛海洋化工厂；其他试剂均为分析纯。红花檵木叶于2009 年4 月采集于河南信阳市潢川县卜集镇，经笔者鉴定为金缕梅科檵木属植物红花檵木L. chinense var.

rubrum，标本存放于河南中医学院（标本号：09041）。 2 提取与分离取干燥红花檵木叶3 kg，粉碎后以8 倍量70％乙醇回流提取3 次，每次提取1 h，合并提取液减压浓缩，得浸膏310 g。取浸膏300 g 溶解于3 L 蒸馏水中，加热溶解，取上清液上于D101 大孔树脂柱，先用水洗脱，除去多糖类成分，再以不同浓度的乙醇（30％、50％、70％、100％）梯度洗脱，收集50％和70％乙醇洗脱部分。70％乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱、氯仿-甲醇梯度洗脱、薄层色谱（TLC）指导合并相同馏分，再经反复Sephadex LH-20 凝胶色谱纯化，得到化合物1、2。50％乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱、氯仿-甲醇梯度洗脱、TLC指导合并相同馏分，再经反复Sephadex LH-20 凝胶色谱和RP-ODS 色谱纯化，得到化合物3～5。 3 结构鉴定

化合物1：黄色粉末，盐酸镁粉反应呈阳性，Molish 反应显阴性；UV（MeOH）λmax：367、266 nm。ESI-MS m/z：285 [M-H]－；1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6，δ，ppm，J/Hz）δ：12.47（1H，s，OH-5），8.03（2H，d，J＝8.9 Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J＝8.9Hz，H-3′，5′），6.41（1H，d，J＝1.8 Hz，H-8），6.17（1H，d，J＝1.8Hz，H-6）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：175.8（C-4），163.8（C-4′），160.6（C-8a），159.1（C-7），156.2（C-5），146.7（C-2），135.6（C-3），129.4（C-2′，6′），121.7（C-1′），115.3（C-3′，5′），103.0（C-4a），93.4（C-8），98.2（C-6）。



湖北海棠叶黄酮类物质提取工艺的研究

方法

2. 1 原料的预处理

将湖北海棠叶洗净, 置于烘箱中60e 干燥24 h以上, 粉碎, 备用[ 7] 。 2. 2 显色液的配制[ 8] 5% NaNO2 溶液: 准确称取12. 5g 固体NaNO2,溶解并移入250mL容量瓶中, 定容至刻度; 10% A l( NO3 ) 3: 准确称取A l( NO3 ) 3 固体25 g, 溶解并移入250mL容量瓶中, 定容至刻度备用; 1mo l/L NaOH: 准确称取N aOH 固体10 g, 溶解并移入250mL容量瓶, 定容至刻度备用。 2. 3 标准溶液的制备[ 9]

准确称取芦丁标准0. 075 2g, 用30% 的乙醇溶液溶解后移入250mL容量瓶中, 并用30%的乙醇定容至刻度, 摇匀, 得浓度为0. 300 8mg /mL标准液备用。 2. 4 标准曲线的绘制[ 10]

分别吸取上述芦丁标准液1. 0、2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0mL于25mL容量瓶中, 用30%乙醇补充至12. 5mL; 加入0. 7mL5% 的NaNO2 溶液, 摇匀, 放置5m in 后加入0. 7ML l0% A


l( NO3 ) 3, 摇匀, 静置6m in后加入5mL 1mo l/LNaOH, 摇匀并用30% 乙醇溶液定容至刻度后, 摇匀, 静置10m in 后于波长510nm处比色测定吸光度; 试剂空白为参比液。以芦丁标准溶液浓度( Y )为纵坐标, 以吸光度( C )为横坐标, 绘制标准曲线, 用最小二乘法进行线性回归分析求得标准回归方程: Y= 0. 198 3C + 0. 000 2, 相关系数r= 0. 999 1。 2. 5 湖北海棠叶中黄酮类物质的提取[

准确称取2. 0 g 湖北海棠叶粉, 分别用水、60%乙醇、乙酸乙酯为提取溶剂, 60 e 恒温水浴浸提3h,抽滤, 定容至100mL。

紫荆花总黄酮的分离纯化与光谱分析

2 方法与结果

21 紫荆花粗黄酮的提取 称取紫荆花花粉10g, 加入15倍量体积55% 乙醇, 于100 水浴回流2h, 纱布过滤, 滤渣中再加入55% 乙醇150 m l于100 水浴回流2 h, 重复1次, 合并滤液, 抽滤。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩, 真空干燥, 得到粗黄酮。一共提3次, 紫荆花中粗黄酮平均得率为732% 。22 粗黄酮的纯化7221 树脂预处理: 用95%乙醇浸泡聚酰胺树脂24 h, 湿法装柱, 用95% 乙醇淋洗至洗脱液与蒸馏水混合( 15)不呈白色混浊, 再用蒸馏水洗至无醇味,然后用3倍柱体积05mo l/L NaOH 洗脱, 加入蒸馏水浸泡树脂1 h 后水洗至中性, 用3倍柱体积05mo l/L HC l洗脱, 加入蒸馏水浸泡树脂1 h后水洗至中性, 备用。

222 上柱洗脱: 将真空干燥的粗黄酮用无水乙醇溶解, 取1 /3倍树脂体积的样品上柱, 分别以3倍量柱体积的蒸馏水、10% 乙醇、30% 乙醇、70% 乙醇进行梯度洗脱。收集各个洗脱部分, 浓缩, 点样, 进行薄层层析, 用乙酸丁酯甲酸水( 1455)展开,以绿原酸作对照。薄层层析结果显示, 水、10% 乙醇洗脱部分绿原酸斑点清晰, 30% 乙醇洗脱部分斑点模糊, 70%乙醇洗脱部分基本无相应斑点。结果表明, 紫荆花总黄酮主要集中在70% 的乙醇洗脱部分。

223 精制黄酮的制备: 以70% 乙醇洗脱液为黄酮收集液, 用水、30% 乙醇洗涤, 旋转浓缩, 真空干燥, 即制得黄酮纯品, 制得的生药中纯化总黄酮得率为220%。

紫荆花总黄酮提取工艺的优化研究

方法与结果

2. 1 不同提取工艺实验

2. 1. 1 水提称取紫荆花粉10 g, 加20倍量双蒸馏水, 于100水浴回流2 h, 纱布过滤, 滤渣中再加双蒸馏水100 m l于100 回流2 h, 重复1次, 合并滤液, 抽滤。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩,真空干燥。

2. 1. 2 水提醇沉称取花粉10 g, 加20 倍量水100 回流2 h,纱布过滤, 滤渣中再加水100 m l于100 回流2 h, 重复1 次, 合并滤液, 抽滤。滤液减压浓缩至原体积的1 /6, 加入3倍量无水乙醇, 4 放置24 h沉淀, 抽滤, 滤液减压浓缩, 真空干燥。

2. 1. 3 醇提称取花粉10 g, 加20 倍量75% 乙醇, 100 回流2h, 纱布过滤, 滤渣中再加75%乙醇100 m l于100 回流2 h, 重复1次, 合并滤液, 抽滤。滤液减压浓缩, 真空干燥。 2. 1. 4 酸醇提取称取花粉10 g, 加20 倍量75%乙醇, 调pH 为3~ 4, 100 回流2 h, 纱布过滤, 滤渣中再加75% 乙醇( pH3 ~ 4)100 m l于100 回流2 h, 重复1次, 合并滤液, 抽滤。滤液减压浓缩, 真空干燥。

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